Требования к помещению и оборудованию ПЦР-лабораторий

1. Помещения, в которых проводят исследования на наличие НК микроорганизмов I-II групп патогенности, размещают в «заразной» зоне лаборатории, проводящей диагностические и другие исследования с указанными микроорганизмами. При наличии возможности помещения располагают в виде отдельного блока. При строительстве новых или реконструкции имеющихся помещений лабораторию ПЦР размещают в отдельно стоящем здании (изолированной части здании) с соблюдением требований СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)» и учетом особенностей устройства вентиляционной системы ПЦР-лаборатории, изложенных в пункте 19 настоящих методических указаний.
2. Рабочая зона ПЦР-лаборатории в соответствии с этапами ПЦР-анализа должна включать следующий минимальный набор последовательно расположенных самостоятельных помещений (см. Схема размещения ПЦР-лаборатории) или отдельно выделенных рабочих зон (в составе других функциональных помещений):

• приема, разборки, первичной обработки материала;
• подготовки проб, выделения нуклеиновых кислот (НК); — приготовления реакционных смесей, проведения ПЦР и обратной транскрипции (ОТ);
• учета результатов методом электрофореза или ГиФА.

3. Комнату выделения НК располагают вблизи от комнаты приема материала, а помещение для учета результатов — по возможности в отдалении от других перечисленных помещений для обеспечения условий, исключающих занос в них продуктов амплификации (ампликонов) с воздушным потоком.
4. Не допускается выполнение ПЦР-исследований в помещениях для проведения работ с использованием культуральных (накопление патогенных биологических агентов) и генно-инженерных методов, в том числе связанных с получением (клонированием) и выделением рекомбинантных плазмид.
5. Зону приёма, регистрации, сортировки, первичной обработки материала (объединение или разделение проб, центрифугирование, инактивацию и т.д.) располагают в комнате приема материала блока для работы с инфицированными животными или в отдельной боксированной комнате. В этих же помещениях может проводиться обработка проб к другим видам исследований (бактериологическое, вирусологическое, серологическое и т.д.). При наличии возможности в помещении устанавливают бокс биологической безопасности III класса защиты (допускается также использование бокса 21ПНЖ, например, фирмы «Изотоп» и др.) или бокс безопасности II класса защиты.
6. Зону по подготовке проб и выделению нуклеиновых кислот размещают в боксированном помещении (микробиологический бокс с пред-боксом) или в комнате заражения и вскрытия животных. Работу проводят в боксе биологической безопасности II или III класса. В рабочей зоне располагают оборудование и предметы, необходимые только для предварительной обработки, выделения НК (примерный перечень).
7. Зону приготовления реакционных смесей и проведения ОТ и ПЦР-амплификации располагают в боксированном помещении или боксе биологической безопасности II класса (или ПЦР-бокса) — для подготовки реакционных смесей для ОТ и ПЦР.
8. Работу по подготовке реакционных смесей для ПЦР и ОТ — ПЦР проводят до доставки в бокс проб, поступающих из зоны выделения НК. Смесь может быть приготовлена также за пределами помещений лаборатории, предназначенных для работы с заразным материалом, например, в комнате (боксе) для розлива питательных сред.
9. При необходимости этап подготовки проб и выделения нуклеиновых кислот может выполняться в одной комнате с этапом ПЦР при наличии в ней бокса биологической безопасности II или III класса защиты для выделения НК и бокса биологической безопасности II класса (или ПЦР-бокса) — для подготовки реакционных смесей для ОТ и ПЦР. Каждый бокс рассматривается как соответствующая рабочая зона.
10. Зону детекции результатов располагают в боксированном помещении. При отсутствии боксированного помещения работу проводят в отдельной комнате, при возможности в ПЦР-боксе.
11. При одновременном использовании двух методов детекции продуктов амплификации — электрофоретического и ГиФА — следует выделить отдельные помещения или две рабочие зоны. Оборудование и принадлежности для каждого вида анализа маркируют применительно к каждой зоне. Обмен посудой и пипетками между зонами не допускается.
12. Помещения ПЦР-лаборатории покрывают кафелем (пол, стены) или масляной краской (стены, потолок), устойчивой к действию моющих и дезинфицирующих средств.
13. Во всех помещениях устанавливают бактерицидные лампы. Рекомендуется дополнительная установка переносного ультрафиолетового бактерицидного облучателя-рециркулятора.
14. Окна должны быть плотно закрыты. Для защиты рабочих столов от попадания прямого солнечного света используют светозащитные пленки из материала, устойчивого к дезинфицирующим средствам. Использование жалюзи не рекомендуется из-за адсорбции пыли.
15. Каждая рабочая зона должна иметь свой набор мебели, лабораторного оборудования, реагентов, автоматических пипеток, наконечников, пластиковой и стеклянной посуды, защитной одежды, обуви, резиновых перчаток, уборочного инвентаря и пр., используемых только в данной комнате (рабочей зоне).
16. Имущество каждой рабочей зоны должно иметь маркировку указанной зоны. Применение его в других помещениях или для других видов исследований не допускается.
17. В рабочих зонах должен быть свой набор холодильников (см. перечень оборудования лаборатории):

• в комнате приема материала от 4 до 8°С, минус 20°С и минус 70°С (при необходимости длительного хранения материала);
• в комнате выделения нуклеиновых кислот от 4 до 8°С и минус 20°С для хранения набора выделения НК; от 4 до 8°С — для хранения препаратов НК; не допускается хранение проб материала или препаратов НК в одном холодильнике с компонентами набора для выделения НК;
• в комнате ПЦР-амплификации от 4 до 8°С и минус 20°С — для хранения наборов обратной транскрипции и амплификации НК;
• в комнате детекции продуктов амплификации от 4 до 8°С — для хранения наборов электрофоретической детекции и ГиФА.

18. Помещения ПЦР-лаборатории оборудуют приточно-вытяжной или вытяжной вентиляцией, соответствующей требованиям пл. 2.3.16. и 2.4.3. СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)».
19. При выполнении ПЦР воздухообмен внутри и между помещениями может повышать опасность контаминации проб из-за вероятности проникновение молекул НК и продуктов амплификации через фильтры. Снижение этой опасности достигается указанной ниже системой вентиляции лаборатории:

• следует полностью исключить воздухообмен между помещением для детекции продуктов амплификации (пост-ПЦР — помещение) и остальными комнатами ПЦР-лаборатории, а также другими помещениями организации (давление воздуха в пост-ПЦР-помещении должно быть ниже, чем в указанных помещениях);
• при смежном расположении комнаты приема материала и комнаты выделения нуклеиновых кислот давление в последней должно быть не ниже, чем в комнате приема материала;
• если обе названные комнаты, входящие в пре-ПЦР-помещение, имеют смежное расположение с помещением для проведения ПЦР, давление воздуха в них должно быть ниже, чем в ПЦР-помещении; при отдаленном размещении ПЦР-помещения давление воздуха в нем должно быть не ниже, чем в пре-ПЦР-помещении.
• Разница в давлении воздуха в помещениях ПЦР-лаборатории создается за счет различий в кратности воздухообмена в них. Расчеты кратности воздухообмена с учетом требований проведения ПЦР-анализа и требований «Инструкции по проектированию санитарно-эпидемиологических станций» приведены в таблице:
• При отсутствии системы вентиляции, указанной в пп. 5.18-5.19, уменьшение вероятности контаминации проб достигается мерами по ограничению воздухообмена между помещениями ПЦР-лаборатории.
• При необходимости в ПЦР-лаборатории могут быть установлены кондиционеры в соответствии с п. 2.4.5. СП 1.3. 1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I—II групп патогенности (опасности)».

Похожие статьи:

Примите к сведению

Информация на этом сайте представлена в справочных и образовательных целях и не должна быть использована как инструкция по лечению. В любых случаях необходимо консультироваться у врача.