Клещи, комары и эктопаразиты (вши и блохи)
Забор материала
После забора и доставки материала в лабораторию комаров, клещей, блох и вшей усыпляют эфиром до обездвижения, нанося каплю эфира на ватно-марлевую пробку. После определения вида и пола материал может быть объединен в пулы в зависимости от вида, пола, места и даты сбора и помещен в сухие чистые пробирки объемом 1,5 мл. Число экземпляров в пуле не должно превышать для комаров — 25, клещей голодных — 5, клещей напитавшихся — 1, блох и вшей — 30.
Предобработка проб
Клещей помещают в микроцентрифужные пробирки объемом 1,5 мл, куда вносят 1 мл 96% этанола, встряхивают на вортексе и центрифугируют в течение 3-5 сек при 2 тыс. g (5 тыс. об/мин на центрифуге «MiniSpin», Eppendorf, Германия) для удаления капель с крышки пробирки.
С помощью вакуумного отсасывателя отдельными наконечниками для каждой пробы удаляют спирт из пробирки.
Вносят в пробирку 1 мл 0,15 М раствора хлорида натрия, встряхивают пробирку и осаждают капли с крышки пробирки на микроцентрифуге в течение 3-5 сек при 2 тыс. g (5 тыс. об/мин на центрифуге «MiniSpin», Eppendorf, Германия).
С помощью вакуумного отсасывателя отдельными наконечниками для каждой пробы удаляют раствор хлорида натрия из пробирки.
Переносят клещей в стерильную фарфоровую чашку, добавляют 0,7 мл 0,15 М раствора хлорида натрия и гомогенизируют пробу.
Наконечником с аэрозольным барьером переносят пробу в микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл и центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 1 минуты для осветления пробы.
РНК и ДНК выделяют из 0,1 мл надосадочной жидкости. При выделении РНК и ДНК из комаров, блох и вшей используют данную методику обработки проб за исключением этапов отмывки в 96% этаноле и 0,15 М растворе хлорида натрия. Насекомых и комаров сразу гомогенизируют в стерильной ступке в 0,15 М растворе хлорида натрия.
Условия хранения материала и предварительно обработанных проб
Материал после разбора и формирования проб:
- при температуре минус 20°С в течение 1 месяца,
- при температуре минус 70°С или в сосуде Дюара с жидким азотом -длительно.
Обработанный материал (после гомогенизации и осветления) хранится длительно при температуре минус 70°С или в сосуде Дюара с жидким азотом.
Допускается только однократное замораживание-оттаивание материала.
Условия транспортирования материала
Материал транспортируется при температуре не ниже минус 10°С в специальном контейнере с охлаждающими элементами или в термосе со льдом.
Похожие статьи:
Примите к сведению
Информация на этом сайте представлена в справочных и образовательных целях и не должна быть использована как инструкция по лечению. В любых случаях необходимо консультироваться у врача.