Способы обеззараживания

Вся работа с исследуемым материалом, подозрительным на зараженность микроорганизмами I-II групп патогенности проводится в соответствии с СП 1.2.011.-94 “Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности.” М.1994 г.

Отобранные для исследования пробы могут быть инактивированы следующими способами:

Материал (кровь, биологические жидкости, экстракты органов, смывы с поверхностей, фильтраты почвы), подозрительный на зараженность не содержащими споры микроорганизмами I-II групп патогенности

  1. обработка мертиолятом натрия с прогреванием при температуре 56°С: к исследуемым образцам добавляют мертиолят натрия, проверенный на бактерицидное действие, до концентрации 1:10000 с последующим прогреванием их при 56°С в течение 30 минут.
  2. Обработка лизирующим буфером с гуанидинтиоцианатом и прогреванием при температуре 65°С: к 100 мкл обработанных мертиолятом натрия образцов, разлитым в микроцентрифужные пробирки типа Эппендорф добавляют 300 мкл лизирующего буфера и инкубируют 15 минут при температуре 65°С. После выполнения данного этапа материал считается обеззараженным. Далее для выделения ДНК используют метод нуклеосорбции на силикагеле, начиная с этапа добавления сорбента.ПЦР выполняют по общепринятой методике в соответствии с указаниями к ПЦР наборам изготовителя.
  3. Приготовление лизирующего буфера с гуанидинтиоцианатом Гуанидинтаоцианат (конечная концентрация 6М) – 18 г, дитиотрейтол (0,2М) – 95 мг и ЭДТА (0,5М) – 1 мг – растворяют в 30 мл дистиллированной воды. Готовый раствор, провереннный на бактерицидное действие, хранится в темной посуде в холодильнике до 6 месяцев.

Материал, подозрительный на зараженность не содержащими споры микроорганизмами III-IV групп патогенности

  1. Прогревание при 100°С в течение 30 минут.
  2. Обработка лизирующим буфером с гуанидинтиоцианатом и прогреванием при 65°С в течение 15 минут.
    Исследуемые образцы в количестве 100 мкл помещают в микроцентрифужные пробирки типа Эппендорф, смешивают с 300 мкл лизирующего буфера с гуанидинтиоцианатом и прогревают при 65°С в течение 15 минут.
    После лизиса гуанидинтиоцианатом для выделения ДНК используют метод нуклеосорбции на силикагеле, начиная с этапа добавления сорбента.
    ПЦР выполняют по общепринятой методике в соответствии с указаниями к ПЦР наборам изготовителя.

Материал, подозрительный на зараженность содержащими споры микроорганизмами II-IV группы патогенности

  1. Герминации спор с обработкой пенициллином и прогреванием при 100°С в течение 10 минут.

    Исследуемый материал в количестве 0,1 мл засевают в пробирки с 0,9 мл бульона Хоттингера рН 7,6 и инкубируют с аэрацией при температуре 37°С в течение 2,5 часов. Добавляют пенициллин (1000ед/мл) и инкубируют при 37°С – 15 минут. Затем прогревают на водяной бане при температуре 100°С в течение 10 минут.

  2. Обработка лизирующим буфером с гуанидинтиоцианатом и прогреванием при температуре 65°С: к 100 мкл обработанных как описано в п. 2.1. образцов, разлитым в микроцентрифужные пробирки типа Эппендорф добавляют 300 мкл лизирующего буфера и инкубируют 15 минут при температуре 65°С. После выполнения данного этапа материал считается обеззараженным. Далее для выделения ДНК используют метод нуклеосорбции на силикагеле, начиная с этапа добавления сорбента. ПЦР выполняют по общепринятой методике в соответствии с указаниями к ПЦР наборам изготовителя.После инактивации проб любым из вышеописанных способов дальнейшие исследования проводятся как с обеззараженным материалом.

Похожие статьи:

Примите к сведению

Информация на этом сайте представлена в справочных и образовательных целях и не должна быть использована как инструкция по лечению. В любых случаях необходимо консультироваться у врача.